四大經(jīng)典核酸純化方法

　　核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的zui重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。目前常見(jiàn)的核酸純化方法有PC抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法，這幾種方法各有其優(yōu)勢和劣勢。

 

　　一、PC抽提法

 

　　PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過(guò)了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì )被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會(huì )損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會(huì )斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個(gè)用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn)，在RNA抽提時(shí)獲得DNA殘留極少的RNA。不過(guò)有一點(diǎn)要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用PC抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢是成本低廉，對實(shí)驗條件要求較低，對于經(jīng)費緊張的實(shí)驗室較為實(shí)用。

 

　　二、高鹽沉淀法

 

　　高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個(gè)非常不錯的方法。與PC抽提方法相比，除了純度的穩定性可能要低一點(diǎn)外，該方法幾乎克服了PC抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規模抽提，但其不足之處是純度(蛋白質(zhì)殘留)不夠穩定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會(huì )更好一些。

 

　　三、離心柱法

 

　　離心柱純化法，是目前試劑盒提取廣泛應用的方法。其zui大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小，純度的穩定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過(guò)離心后會(huì )進(jìn)入另外一個(gè)離心管中，與含有核酸的柱子*是分開(kāi)的，所以洗滌更*。其致命弱點(diǎn)是樣品過(guò)量，提取效率較低，且需要反復離心，操作復雜，成本也較高。

 

　　四、生物磁珠法

 

　　生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面，通過(guò)介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場(chǎng)下使核酸附著(zhù)于磁珠定向移動(dòng)，從而達到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比，生物磁珠法具有很多*的優(yōu)勢，如：

 

　?、偬崛§`敏度高（微量材料即可提?。?/div>